ג'פרסון אירפלין הוקמה בקיץ 1965 על ידי מרטי בלין שהיה גם הזמר וכותב השירים. הוא יצר להקה כדי שתופיע במאטריקס, מועדון שהתכוון לפתוח בסן- פרנסיסקו.
יחד עם הזמר והגיטריסט פול קנטנר, הזמר והגיטריסט ג'ורמה קאוקונר, המתופף סקיפ ספנס, הבסיסט ג'ק קאסאדי והזמרת סיגן אנדרסון, בלין מקים את הלהקה.
ב-1966 הלהקה חותמת על חוזה הקלטות עם RCA, ומוציאה את אלבום הבכורה שלה "Jefferson Airplane Takes Off" האלבום זכה למעט תגובות ולא נחל הצלחה רבה. לאחר יציאת האלבום אנדרסון וספנס פורשים מן הלהקה ובמקום מצטרפים המתופף ספנסר דריידן והזמרת גרייס סילק.